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簡要描述:Bilirubin,小鼠膽紅素酶聯(lián)免疫試劑盒供應(yīng)商用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠膽紅素(Bilirubin)的含量。
產(chǎn)品型號:
所屬分類:小鼠酶聯(lián)免疫試劑盒
更新時間:2022-08-29
Bilirubin,小鼠膽紅素酶聯(lián)免疫試劑盒供應(yīng)商
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠膽紅素(Bilirubin)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠膽紅素(Bilirubin)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠膽紅素(Bilirubin)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
Bilirubin,小鼠膽紅素酶聯(lián)免疫試劑盒供應(yīng)商準備試劑與收集血樣
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等裂解產(chǎn)物盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成16000pg/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液200ul。在*管中加入16000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
標本激活方法
1. 將450ul標本稀釋液加入到一支1.5ml進口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標本。
2. 加20ul 1 N HCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60± 2分鐘。
3. 加20ul 1 N NaOH,蓋緊,上下混勻。
4. 即用,或放-20/-70℃保存3天。計算結(jié)果時乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標本HSP60的水平可能有較大差異,請根據(jù)實際情況靈活掌握稀釋度)
5. 細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標本稀釋液+50ul樣本+20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。
改良雙抗體夾心法
本法是雙抗體夾心法的一種改良形式,也是用于測定抗原的,其原理可用圖來表示。本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體,經(jīng)洗滌加入含有欲測抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標記的特異性抗體b,而這次加入的抗體b于*次包被于固相載體上的特異性抗體a對被測抗原來說都是特異性的,但不是用同種動物免疫制備的,否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后,再加酶標記抗b抗體,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進行測定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此,放大的倍數(shù)更高,故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時避免標記特異性抗體,而另一優(yōu)點是只要標記一種抗抗體,即可達到多種應(yīng)用。
檢測程序
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。
2. 以標準品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)HSP60含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的HSP60 檢測濃度小于65pg/ml。
2. 特異性:可同時檢測重組或天然的人HSP60。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于12%。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!