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C5a,小鼠補體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導

C5a,小鼠補體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導

簡要描述:C5a,小鼠補體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠補體片斷5a(C5a)的含量。

產(chǎn)品型號:

所屬分類:小鼠酶聯(lián)免疫試劑盒

更新時間:2022-08-29

詳細說明:

C5a,小鼠補體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠補體片斷5a(C5a)的含量。

l 有效期:6個月

l 保存條件:2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠補體片斷5a(C5a)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠補體片斷5a(C5a)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

C5a,小鼠補體片斷5a酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)指導性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。處

3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

操作步驟

實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

用于檢測未知抗體的間接法:

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。

   ↓

加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

   ↓

于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,   37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

   ↓

加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

     ↓

終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

     ↓

結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

組成

48孔配置 96孔配置 保存

說明書 1份 1份

封板膜 2片(48) 2片(96)

密封袋 1個 1個

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品:13.5U/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 30ml×1瓶 2-8℃保存

樣品收集、處理

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。



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