中性粒細(xì)胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等,是機體天然免疫力的重要組成部分。 試劑及材料 1. 白色葡萄球菌 2. 肉湯培養(yǎng)基 3. 鹼性美藍(lán)液 ELISA試劑盒樣品類型(SAMPLE TYPES): 標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清 或血漿。每個標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。 樣品采集: 收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本, 將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分 激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。 ELISA試劑盒注意事項: 收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,儲存在 4 ℃ 備用,如有特殊 原因需要周期收集標(biāo)本, 將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保 存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。 操作方法 1. 菌液的制備 將白色葡萄球菌接種于中,放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右;置水浴中加熱100℃ 10min殺死細(xì)菌,用無菌生理鹽水稀釋成6×108 細(xì)菌/ml備用; 2. 用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi),輕輕攪動混勻, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預(yù)溫),在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次; 3. 作用完畢,取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,鹼性美藍(lán)液染2~3min,置油鏡下觀察。隨機計數(shù)100個中性粒細(xì)胞,分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細(xì)胞數(shù),對有吞噬作用的白細(xì)胞,應(yīng)同時記錄所吞噬的細(xì)菌數(shù); 結(jié)果分析 吞噬細(xì)胞%=即100個中性粒細(xì)胞中吞噬有細(xì)菌的細(xì)胞數(shù); 吞噬指數(shù)=將100個中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100,得到每個白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù),即為吞噬指數(shù)。 |