不少朋友在為春節(jié)前的zui后一次實(shí)驗(yàn)認(rèn)真準(zhǔn)備著，而在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中大大小小的問(wèn)題總會(huì)遇到一些。今天上午，一位來(lái)自上海科研所的客戶(hù)孫老師來(lái)電與我公司技術(shù)專(zhuān)員交流ELISA實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。在交流的過(guò)程中，孫老師表示：

    “做定量要驗(yàn)證試劑盒的線性范圍，目前我的盒子線性范圍太窄，線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為16。我嘗試了改變反應(yīng)模式，將線性范圍略擴(kuò)寬了一些——線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為32。如果高點(diǎn)往上一個(gè)梯度延伸，則R平方就只有0.96（已經(jīng)是的結(jié)果了）?？偟膩?lái)說(shuō)線性范圍還是太窄。我參考了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒，基本上線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值都≥64。我知道，ELISA的信號(hào)值范圍窄，但我想線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值≥64應(yīng)該還是可以的。那么如何才能將試劑盒的線性范圍擴(kuò)寬？"

    對(duì)此，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)專(zhuān)員分析解說(shuō)到：試劑盒的線性范圍影響的主要因素應(yīng)該是抗體本身的性質(zhì)，其次才是ELISA反應(yīng)的各種條件。如果在優(yōu)化了各種反應(yīng)條件下線性范圍還是很窄，只能說(shuō)制的抗體不是很好。而線性范圍的影響有兩個(gè)因素，*個(gè)可能因素是本身抗體的親和力，親和力越高靈敏度越高，高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高，若標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近于1，抗體親和力還是可以的。比值沒(méi)有相關(guān)規(guī)定說(shuō)一定要高于64。

    第二個(gè)可能因素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同，線性范圍也不同，如果你的項(xiàng)目在某一濃度達(dá)到平臺(tái)值，說(shuō)明這個(gè)蛋白與其抗體結(jié)合與解離在此濃度下達(dá)到了平衡，改變其他條件也無(wú)法增加，除非改用化學(xué)發(fā)光法。若是同一種蛋白其線性范圍沒(méi)有其他盒子做的高，可嘗試改變條件降低其背景值從而降低低濃度來(lái)提高比值。

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