ELISA技術操作要點，抗原和抗體

 在ELISA實施過程中，抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。

ELISA所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經純化，提取出特定的抗原成分后才可應用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術難度且要求較為昂貴的儀器設備和試劑，其應用仍十分普遍，特別是對那些天然抗原不易得到的試驗，更顯出其獨到之處。

用于ELISA的抗體有多克隆的和單克隆的。抗血清成分復雜，應從中提取IgG才可用于包被固相或酶標記。含單克隆抗體的小鼠腹水中的特異性抗體含量較高，有時可適當稀釋后直接進行包被。制備酶結合物用的抗體的質量往往要求有較高的純度。經硫酸銨鹽析純化的IgG可進一步用各種分子篩層析提純。也可用親和層析法提純特異性IgG，如用酶消化IgG后提取的Fab片段，則效果更好。

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